Optimización de la Reacción en Cadena de la Polimerasa para la Detección del gen B1 de T. gondii

Polymerase Chain Reaction Optimization for Detection of gen B1 Optimización de PCR para el gen B1 de T. gondii

Objetivo: Optimizar las condiciones de amplificación del gen B1 (35 copias en el genoma) para la detección de ADN de T.gondii en casos probables de toxoplasmosis cerebral. Materiales y métodos: Se realizó extracción de ADN a partir de exudado peritoneal de ratones inoculados con la cepa RH de T. gondii obteniendo 17 ml con una concentración inicial de 1x10⁷ parásitos/ml. Se optimizaron las condiciones de PCR del gen B1. Resultados: Se obtuvo amplificación de un fragmento de 132 pb a partir de ADN obtenido de diluciones seriadas desde 1x10⁶ a 1x10^-1parásitos por ml, estableciéndose un límite de detección de 1 taquizoíto de T. gondii.

1. Priest J, Moss D, Arnold B, Hamlin K, Jones C, Lammie P. Seroepidemiology of Toxoplasma in a coastal region of Haiti: multiplex bead assay detection of immunoglobulin G antibodies that recognize the SAG2A antigen. Epidemiol Infect. 2015; 143(3): 618-30. doi: http://dx.doi.org/10.1017/S0950268814001216.
2. Ahmadpour E, Daryani A, Sharif M, Sarvi S, Aarabi M, Mizani A, et. al.Toxoplasmosis in immunocompromised patients in Iran: a systematic review and meta-analysis.J Infect Dev Ctries. 2014; 15(12):1503-10. doi: http://dx.doi.org/10.3855/jidc.4796.
3. Meira C, Pereira-Chioccola V, Vidal J, de Mattos C, Motoie G, Costa-Silva TA, et. al.Cerebral and ocular toxoplasmosis related with IFN γ, TNF-, and IL-10 levels. Front Microbiol. 2014; 5:492. doi: http://dx.doi.org/10.3389/fmicb.2014.00492.
4. Tonini R, Vidal J, Vera L. Molecular diagnosis of cerebral toxoplasmosis: comparing markers that determine Toxoplasma gondii by PCR in peripheral blood from HIV-infected patients The Brazilian Journal of Infectious Diseases. 2010; 14(4): 346-50.
5. Anselmo L, Vilar F, Lima J, Yamamoto A, Bollela V, Takayanagui O. Usefulness and limitations of polymerase chain reaction in the etiologic diagnosis of neurotoxoplasmosis in immunocompromised patients. J Neurol Sci. 2014; 346 (1-2):231-4. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.jns.2014.08.034
6. Resolución 458 de 2011, Instituto Nacional de Salud.
7. Bretagne S, Costa JM, Vidaud M, Van Nhieu JT, Feith J. Detection of Toxoplasma gondii by Competitive DNA Amplification of Bronchoalveolar Lavage Samples. JID 1993;168 (6): 1585-88.
8. Reishi U, Bretagne S, Kruger D, Ernault P, Costa JM: Comparison of two targets for the diagnosis of Toxoplasmosis by real-time PCR using fluorescence resonance energy transfer hybridization probes. BMC Infect Dis. 2003; 3: 7 doi http://dx.doi.org/10.1186/1471-2334-37.
9. Asgari Q, Keshavarz H, Shojaee S, Motazedian M, Mohebali M, Miri R, et al. In Vitro and In Vivo Potential of RH Strain of Toxoplasma gondii (Type I) in Tissue Cyst Forming. Iran J Parasitol. 2013; 8(3):367-75.
10. Taravati P, Lam D, Van Gelder R. Role of molecular diagnostics in ocular microbiology. Curr Ophthalmol Rep. 2013;1(4). doi: http://dx.doi.org/10.1007/s40135-013-0025-1.
11. Bourdin C, Busse A, Kouamou E, Touafek F, Bodaghi B, Le Hoang P, Mazier, et al. PCR-based detection of Toxoplasma gondii DNA in blood and ocular samples for diagnosis of ocular toxoplasmosis. J Clin Microbiol. 2014; 52(11):3987-91. doi: http://dx.doi.org/10.1128/JCM.01793-14.
12. Xiao J, Gao G, Li Y, Zhang W, Tian Y, et al. Spectrums of Opportunistic Infections and Malignancies in HIV-Infected Patients in Tertiary Care Hospital, China. PLoS ONE. 2013; 8(10): e75915. doi: http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0075915
13. Cortés LJ, Duque S, López MC, Moncada D, Molina D, Gómez-Marín JE, Gunturiz ML. Gene polymorphisms in the dihydrofolate reductase (dhfr) and dihydropteroate synthase (dhps) genes and structural modelling of the dhps gene in Colombian isolates of Toxoplasma gondii. Biomedica. 2014; 34(4):556-66, doi: http://dx.doi.org/10.1590/S0120-41572014000400008.
14. ==========================================
15. DOI: http://dx.doi.org/10.22490/24629448.1044