Efecto antimicrobiano In vitro de propóleos argentinos, colombianos y cubano sobre Streptococcus mutans ATCC 25175
Zulma Moreno H. OD.1, Patricia Martínez A. OD.1, Judith Figueroa. MSc.2
1Universidad Nacional de Colombia Facultad de Odontología. Sede Bogotá.
2Lic. Micr. MSc. Docente, Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia, Universidad Nacional de Colombia. Sede Bogotá.
Correspondencia: revistanova@unicolmayor.edu.co
Recibido: 9-05-2007 / Aceptado: 13-06-2007
El mejor efecto bacteriostático lo presentó la muestra 2 (propóleo colombiano) a un periodo de incubación de 24 horas. El 70% de las muestras de propóleo incrementaron su actividad luego de un tiempo de incubación de 48 horas, en relación con el efecto detectado a las 24 horas. A mayor exposición de las bacterias al propóleo, las muestras colombianas mostraron un efecto superior, las argentinas un efecto moderado y las demás muestras (30%), permanecieron estables.
Palabras claves: concentración mínima bactericida, concentración mínima bacteriostática, propóleo, Streptococcus mutans.
The highest effect bacteriostatic was presented by the sample 2 (propolis from Colombia) after 24 hours of incubation. 70% of the propóleo samples increased their activity after a time of incubation of 48 hours compare to the effect shown to the 24 hours. All the Colombian samples showed a superior effect, when the bacteria were exposed to the propóleo for a longer period of time; in two of these cases until of five dilutions, samples 2 and 3, this effect was presented in a moderate way, using the argentine samples 6 and 10 while the other samples (30%) remained steady.
Keywords: minimun bactericidal concentration, minimun bacteriostatic concentration, propolis, Streptococcus mutans.
En los últimos años se han realizado innumerables investigaciones acerca de productos provenientes de las abejas y sus potenciales beneficios para la salud humana, uno de estos productos es el propóleo, con utilidad en biología y medicina (4). Dobrowolski y colaboradores mencionan algunos de sus efectos como: actividad antiinflamatoria, bacteriostática, bactericida, cicatrizante, analgésica y anestésica (5). Es de resaltar que la presencia en el propóleo de compuestos con estas actividades, pueden variar de una región a otra, ya que su presencia se asocia en parte a las resinas que las abejas recogen de las plantas presentes en el entorno (4).
Este trabajo de investigación se enfoca a la actividad bactericida y bacteriostática de propóleos frente a un microorganismo de cavidad oral como el Streptococcus mutans. Según Hyun Koo y colaboradores, el propóleo inhibe la unión de este microorganismo a la superficie del esmalte, actuando sobre la enzima glucosiltransferasa que ha sido reconocida como un factor de virulencia en la patogenicidad de la caries dental (6,7).
Extractos blandos de propóleo: se tomaron cuatro muestras de propóleo argentino, cinco colombianos y uno cubano, que habían sido obtenidos por extracción con alcohol etílico al 96% (3). Para ajustarlos todos a la misma concentración, se tomó una submuestra de cada propóleo y se llevó a evaporación a 37°C por 24 horas, para la obtención del extracto blando. Posteriormente, se pesó el extracto obtenido y con base en este resultado se prepararon diluciones en alcohol etílico al 96%, para así obtener una solución a concentración de 30mg/mL (3%) (3).
La técnica empleada para hallar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), fue la reportada por el equipo de Tolosa (10). Consiste en tomar 10 tubos de ensayo con 2ml de caldo BHI en cada uno; al primero de ellos se añade 2ml del extracto de propóleo y se realizan diluciones seriadas en base dos. De esta manera se consiguen diluciones entre 15 y 0.02 mg/mL de propóleo.
Posteriormente, se inoculó 0.1mL de solución bacteriana a una escala de turbidez de Mc. Farland No. 3 equivalente a 9 x 108 UFC/mL, para cada uno de los diez tubos. Para este estudio se incluyó un control con alcohol etílico al 96%. Luego de este proceso, se incubó por 24 horas a 37ºC. Pasado este lapso de tiempo se sembró de cada tubo 100_l. Con asa calibrada en Agar BHI y se llevó nuevamente a incubación bajo las mismas condiciones. Este proceso se repitió luego de 48 horas de exposición de la bacteria al propóleo.
Figura 1. Lectura CMB CMB y CMBs en Agar BHI.
Las lecturas de concentración mínima bacteriostática (CMBs) se evaluaron por el grado de crecimiento o no de la bacteria luego de haber estado expuesta a la actividad de los distintos propóleos en un lapso de tiempo de 24 y 48 horas. La concentración mínima bactericida (CMB) se consideró como la dilución más alta en la cual no se presentó crecimiento bacteriano y la CMBs como la dilución más alta en la cual el crecimiento bacteriano fue mínimo (máximo 5 colonias), Figura 1.
La totalidad de las muestras analizadas manifestaron actividad contra Streptococcus mutans cuando se emplean a concentraciones de 15 a 3.75 mg/mL. Los propóleos estudiados poseen actividad bactericida y bacteriostática frente a la cepa de referencia Streptococcus mutans ATCC 25175. Los compuestos biológicamente activos del propóleo que determinan esta inhibición no fueron analizados en este estudio. El propóleo mostró actividades inhibitorias a concentraciones tan bajas como 0.02 mg/mL, lo cual se observó en el caso de las muestras 2 y 3, propóleos colombianos, Tabla 1.
Los propóleos colombianos aumentaron la actividad bactericida a las 48 horas con respecto a la lectura de las 24 horas, pasando de 0.46 a 0.11 mg/mL para la muestra 1, de 0.93 a 0.02 mg/mL para las muestras 2 y 3, de 7.5 a 0.46 mg/mL para la muestra 4 y de 3.75 a 0.93 mg/ml para la muestra 5. Dos de las muestras provenientes de Argentina mostraron un cambio en su actividad bactericida durante el paso de 24 a 48 horas, la muestra 6 de 0.46 a 0.23 mg/mL y la muestra 10 de 3.75 a 0.46 mg/mL. Las demás muestras, incluyendo el propóleo cubano, no mostraron cambios en el tiempo. Las muestras 2, 3, 4, 5 y 10 evidenciaron efectos bacteriostáticos a las concentraciones estudiadas.
Tabla 1. Actividad bactericida y bacteriostática de propóleo de diferente origen frente a la cepa de referencia de S. mutans ATCC 25175.
Los valores límite bacteriostático y bactericidas para cada propóleo se muestran en la Tabla 2. Los promedios de actividad bacteriostática correspondieron a concentraciones de propóleo de 1,141 mg/mL y de actividad bactericida de 1,893 mg/mL.
Dos muestras colombianas mostraron poca acción luego de 24 horas de incubación, comparándolas con las demás, la actividad bactericida y bacteriostática se evidenció a concentración de 7.5 mg/mL (CMB) y 3.75 mg/mL (CMBs) para la muestra 4 y para la muestra 5 de 3.75 mg/mL (CMB) y 1.87 mg/mL (CMBs). Estos resultados estuvieron por debajo del promedio de los propóleos analizados. Las muestras 2 y 3, de origen colombiano, fueron las que presentaron un mejor comportamiento, ya que en ambas se detectó un efecto bactericida a una baja concentración =0.02mg/ml luego de 48 horas de incubación.
Tabla 2. Valores en mg/mL para CMB y CMBs por muestra frente a S. mutans ATCC 25175
El tiempo de exposición de las bacterias al propóleo es una variable importante en la evaluación de la actividad frente a S. mutans. Al evaluar a 24 y 48 horas, mejora la capacidad para destruir el microorganismo, efecto evidente en la actividad de las muestras 1 a 6 y 10, que después de trascurridas 48 horas mejoraron su actividad bacteriostática y bactericida, Figuras 2 y 3. El 100% de las muestras de propóleos colombianos y al 50% de los argentinos tuvieron este efecto.
Figura 2. CMB de propóleos sobre S. mutans luego de 24 y 48 horas de exposición.
Las muestras de propóleo 7, 8 y 9 no presentaron variación en las lecturas realizadas durante las 24 y 48 horas, ya que su CMB en ambos periodos de tiempo permaneció estable, Figuras 2 y 3.
Todos los propóleos analizados mostraron algún grado de actividad antimicrobiana sobre Streptococcus mutans. Las concentraciones empleadas en el estudio correspondieron a las mismas utilizadas en los estándares para pruebas in vitro, de antibióticos comerciales. Esto demuestra el alto potencial de uso de los propóleos en el humano, dado que no ha sido descrito resistencias bacterianas a estos compuestos naturales de las abejas.
Los hallazgos del estudio permiten plantear el uso de propóleos activos a Streptococcus mutans en la prevención de la caries dental, teniendo en cuenta que algunos de ellos incrementan su efecto con el tiempo. Es importante continuar los estudios sobre propóleos y su uso potencial en la prevención y tratamiento de patologías de cavidad oral.